[1]上海交通大学生命科学技术学院力学生物学研究所
目的:探究张应变条件下micro RNA-33(mi R-33)调控移植静脉内膜增生的机制,为缓解静脉移植内膜增生提供潜在治疗方法。方法:SD大鼠进行"套管法"自体静脉移植,Elastin-van Gesion染色观察内膜增生情况。使用FX4000细胞应力加载装置(Flexcell International)对静脉平滑肌细胞加载频率1.25 Hz、幅度10%的张应变以模拟静脉在动脉环境受到的张应变力学刺激。q RT-PCR检测mi R-33表达,Western blotting检测相关蛋白,Brd U增殖实验和CCK-8试剂盒检测细胞增殖。双萤光素酶报告基因验证mi R-33与靶基因的作用关系。骨形态发生蛋白3(BMP3)特异性si RNA干扰片段、重组蛋白以及mi R-33 inhibitor和mimics用于研究细胞功能和相关信号通路。在体局部注射mi R-33 agomir和antagomir来验证mi R-33在静脉移植内膜增生中的作用。结果:移植静脉出现明显内膜增生,mi R-33显著降低,而BMP3、p-Smad5和p-Smad2表达明显上升;牵拉条件下得到与移植静脉中相同的结果。双萤光素酶报告基因实验证明BMP3是mi R-33的靶基因。mi R-33 mimics抑制BMP3及下游信号分子p-Smad2、p-Smad5表达和细胞增殖;mi R-33 inhibitor或者BMP3重组蛋白得到类似结果。在体注射mi R-33agomir降低BMP3及下游信号分子表达,亦可缓解静脉移植内膜增生。结论:mi R-33-BMP3-Smad信号通路参与移植静脉平滑肌细胞增殖;mi R-33可以缓解静脉移植内膜增生过程,具有潜在临床应用前景。
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